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本制品为Pfu DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg²⁺、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Pfu DNA Polymerase具有5'-3'DNA聚合酶活性和5'-3'外切核酸酶活性的同时具有3'-5'外切核酸酶活性，因此在DNA扩增过程中具备纠错能力，是目前发现的错配率最低的耐高温DNA Polymerase。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本制品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。本制品所含的Pfu DNA聚合酶具有错配率低，耐高温的特点，适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等反应。

• 经检验无外源核酸酶活性；
  
• PCR方法检测无宿主残余DNA；
  
• 能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因；
  
• 2～8℃存放三个月，活性无明显改变。

• PCR反应体系
  

  成分	用量	终浓度
  2×Pfu PCR MasterMix(With Dye)	25μL	1×
  Forward Primer，10μM	2μL	0.4μM
  Reverse Primer，10μM	2μL	0.4μM
  Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μL
  ddH2O	至50μL

  
  注意：用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，引物浓度请以终浓度0.1～1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
  
• PCR反应条件
  

  步骤	温度	时间	循环数
  预变性	94℃	2min	1
  变性	94℃	30 s	25～35
  退火	55～65℃	30s
  延伸	72℃	60s
  终延伸	72℃	5min	1

• 2×Pfu PCR MasterMix含有Pfu DNA Polymerase,3mM MgCl₂和400μM each dNTP。
  
• Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
  
• 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
  
• Pfu酶具有3'-5'外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，延伸时间根据所扩增片段大小设定，本制品的扩增延伸速率为1kb/min。
  
• 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
  
• 本制品具有3'-5'外切核酸酶活性，PCR产物为平端不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。